Mundarija:

Klonlarni qanday tanlaysiz?
Klonlarni qanday tanlaysiz?

Video: Klonlarni qanday tanlaysiz?

Video: Klonlarni qanday tanlaysiz?
Video: Разбор ЭНДИНГА Боруто ◉ Режим МУДРЕЦА у БОРУТО ◉ Режим Отшельника Боруто 2024, Noyabr
Anonim

Qachon tanlash a klonlash , ildizlarning kuchli, oq va ishtiyoq bilan o'sadigan muhitdan chiqib ketishiga ishonch hosil qiling. Agar ildizlar jigarrang va chirigan bo'lsa yoki boshqa tarzda harakatsiz bo'lib ko'rinsa, uni orqaga qo'ying va yaxshiroqsini qidiring.

Bundan tashqari, bitta hujayrani qanday qilib klonlash mumkin?

  1. 200 mL muhitni o'z ichiga olgan 96 quduqli plastinkaning birinchi qudug'iga (A1) ~16 000 hujayra qo'yish uchun hujayralarni hisoblang.
  2. A1 o'z ichiga olgan hujayralardan 100 mkl olib tashlang va B1 bilan aralashtiring, 100 mkl olib tashlashdan va C1 bilan aralashtirishdan oldin yaxshilab aralashtirish uchun 3 marta yuqoriga va pastga pipetlang.

Bundan tashqari, sutemizuvchilar hujayra koloniyasini qanday tanlash mumkin? Differentsiallanmagan sog'lomni tanlash uchun plastinkani mikroskop ostiga qo'ying koloniyalar . Koloniyalarni tanlang 10ulga o'rnatilgan P-20 pipetkasi yordamida. Ehtiyotkorlik bilan tanlash a koloniya ni buzmasdan koloniya yakkalikka hujayralar , va uni tripsin bilan 96-quduqli plastinkaga o'tkazing. Tarqatish uchun bir necha marta yuqoriga va pastga pipetka torting koloniya.

Shunga mos ravishda, klon silindridan qanday foydalanasiz?

Foydalanish steril o'rta forseps, ko'taring a klonlash tsilindri . Yassi pastki qismini sekin bosing silindr silliq silikon surtma ichiga soling va keskin vertikal harakat bilan olib tashlang. To'g'ri bajarilgan bo'lsa, bu yog'ning pastki qismida bir tekis taqsimlanishini ta'minlaydi silindr . ni o'rnating silindr koloniya ustida.

Barqaror hujayra liniyalari uchun koloniyalarni qanday tanlash mumkin?

Barqaror hujayra liniyalarini yaratish protokoli quyida ko'rsatilganidek, bir necha bosqichlarni talab qiladi:

  1. Optimal tanlash antibiotik kontsentratsiyasini aniqlash uchun o'ldirish egri chizig'ini hosil qiling.
  2. Kerakli plazmid konstruksiya(lar)ga ega hujayralarni transfektsiya qilish
  3. Barqaror poliklonal koloniyalarni tanlang va kengaytiring.
  4. Cheklangan suyultirish va kengaytirish orqali bitta klonlarni aniqlang.

Tavsiya: