Gibson klonlash qanday ishlaydi?
Gibson klonlash qanday ishlaydi?

Video: Gibson klonlash qanday ishlaydi?

Video: Gibson klonlash qanday ishlaydi?
Video: Gibson G Force: Установка и Настройка - by Nick Percev 2024, Noyabr
Anonim

The Gibson klonlash Master Mix bitta bufer ichidagi uch xil fermentdan iborat. Har bir ferment reaksiya uchun o'ziga xos va o'ziga xos funktsiyaga ega: T5 Exonuclease - DNK 5' uchidan orqaga chaynash orqali bir zanjirli DNK 3' o'simtalarini hosil qiladi. To'ldiruvchi DNK fragmentlari keyinchalik bir-biriga yopishishi mumkin.

Buni hisobga olsak, Gibson qanday ishlaydi?

The Gibson Assembly® usuli - bu klonlash jarayoni bo'lib, u ikki yoki undan ortiq fragmentlarni cheklash fermenti hazm qilish yoki mos keladigan cheklash joylariga ehtiyoj sezmasdan klonlash imkonini beradi. Buning o'rniga, qo'shni bo'laklarni muammosiz birlashtirishga imkon berish uchun foydalanuvchi tomonidan belgilangan bir-birining ustiga chiqadigan uchlari bo'laklarga kiritilgan.

Xuddi shunday, Gibson Assembly Master Mix-da nima bor? The Gibson klonlash master aralashmasi bitta bufer ichidagi uch xil fermentdan iborat. Har bir ferment reaksiya uchun o'ziga xos va o'ziga xos funktsiyaga ega: T5 Exonuclease - DNK 5' uchidan orqaga chaynash orqali bir zanjirli DNK 3' o'simtalarini hosil qiladi. To'ldiruvchi DNK fragmentlari keyinchalik bir-biriga yopishishi mumkin.

Shu tarzda, Oltin darvoza yig'ilishi qanday ishlaydi?

Oltin darvoza klonlash yoki Oltin darvoza yig'ilishi tadqiqotchiga II toifa cheklash fermentlari va T4 DNK ligazasidan foydalangan holda bir vaqtning o'zida va yo'nalishda bir nechta DNK bo'laklarini bitta bo'lakka yig'ish imkonini beruvchi molekulyar klonlash usuli. Bu yig'ilish hisoblanadi in vitroda amalga oshiriladi.

Gateway klonlash qanday ishlaydi?

The GATEWAY Klonlash Texnologiya fag l tomonidan DNKni E ga integratsiyalash uchun foydalaniladigan saytga xos rekombinatsiya tizimiga asoslanadi. Kiritilgan fag DNKsini o'rab turgan attL va attR joylari fag l va fagdagi attP joyini isloh qilish uchun eksizyon hodisasi paytida maxsus saytni qayta birlashtiradi. E.dagi attB sayti.

Tavsiya: