Video: Sanger DNK sekvensiyasi qanday ishlaydi?
2024 Muallif: Stanley Ellington | [email protected]. Oxirgi o'zgartirilgan: 2023-12-16 00:24
Sanger ketma-ketligi natijada 3' uchida dideoksinukleotidlar bilan tugaydigan turli uzunlikdagi cho'zilish mahsulotlari hosil bo'ladi. Keyinchalik kengaytma mahsulotlari kapillyar elektroforez yoki Idoralar bilan ajratiladi. Molekulalar gel polimer bilan to'ldirilgan uzun shisha kapillyarga elektr toki bilan AOK qilinadi.
Shu tarzda, DNK sekvensiyasining Sanger usuli nima?
Sanger ketma-ketligi , shuningdek, zanjirni tugatish sifatida ham tanilgan usuli , uchun texnika hisoblanadi DNK ketma-ketligi zanjirni tugatuvchi dideoksinukleotidlarni (ddNTP) tanlab birlashtirishga asoslangan. DNK in vitro jarayonida polimeraza DNK replikatsiya. U Frederik tomonidan ishlab chiqilgan Sanger va hamkasblari 1977 yil.
Bundan tashqari, zanjirni tugatish tartibi qanday ishlaydi? Sanger DNK ketma-ketlik nomi bilan ham tanilgan zanjir - tugatish usuli ketma-ketlik . ddNTPlar natijasida tugatish ddNTPlarda nukleotidlar o'rtasida fosfodiester bog'lanish hosil bo'lishi uchun zarur bo'lgan 3'-OH guruhi yo'qligi sababli DNK zanjiri. Ushbu rishtasiz, zanjir hosil bo'ladigan nukleotidlar soni tugatilgan.
Oddiy qilib aytganda, nima uchun biz Sanger ketma-ketligini qilamiz?
Sanger ketma-ketligi a usuli ning DNK ketma-ketligi tomonidan zanjirni tugatuvchi dideoksinukleotidlarning tanlab kiritilishiga asoslangan DNK in vitro jarayonida polimeraza DNK replikatsiya. U hali ham qisqa o'qishdan ustunlikka ega ketma-ketlik texnologiyalar (Illumina kabi) bu mumkin mahsulot DNK ketma -ketligi 500 dan ortiq nukleotidlarni o'qiydi.
Sanger ketma-ketligi aniqmi?
Sanger ketma-ketligi 99,99% bilan aniqlik klinik tadqiqotlar uchun "oltin standart" hisoblanadi ketma-ketlik . Biroq, yangi NGS texnologiyalari yuqori o'tkazuvchanlik qobiliyati va har bir namuna uchun arzonligi tufayli klinik tadqiqot laboratoriyalarida keng tarqalgan.
Tavsiya:
DNK sekvensiyasida DdNTP qanday vazifani bajaradi?
DdNTP tarkibiga ddATP, ddTTP, ddCTP va ddGTP kiradi. DdNTP DNK tuzilishini tahlil qilishda foydalidir, chunki u DNK replikatsiyasi paytida DNK zanjirining polimerizatsiyasini to'xtatib, shablon zanjiridan replikatsiya qilingan turli uzunlikdagi DNK zanjirlarini hosil qiladi
PCR dideoksi DNK sekvensiyasida qanday rol o'ynaydi?
PCR dideoksi DNK sekvensiyasida qanday rol o'ynaydi? PCR dan foydalanish DNKning ancha past darajadagi shablonlaridan DNK sintezini aniqlashga imkon beradi. Nima uchun DNK sekvensiyasi paytida dideoksinukleotidning qo'shilishi "replikatsiyani tugatuvchi" hodisa sifatida aniqlanadi?
Sanger sekvensiyasi qanchalik aniq?
99,99% aniqlik bilan Sanger sekvensiyasi klinik tadqiqotlar ketma-ketligi uchun "oltin standart" hisoblanadi. Shu bilan birga, yangi NGS texnologiyalari yuqori o'tkazuvchanlik qobiliyati va namuna uchun arzonligi tufayli klinik tadqiqot laboratoriyalarida keng tarqalgan
Sanger sekvensiyasi va keyingi avlod ketma-ketligi o'rtasidagi farq nima?
Keyingi avlod ketma-ketligi (NGS) texnologiyalari o'xshash. Sangersequencing va NGS o'rtasidagi muhim farq - bu ketma-ketlik hajmi. Sanger usuli bir vaqtning o'zida faqat bitta DNK bo'lagini ketma-ketlashtirgan bo'lsa-da, NGS massiv ravishda parallel bo'lib, har bir ishda bir vaqtning o'zida millionlab fragmentlarni ketma-ketlashtiradi
Rekombinant DNK texnologiyasining texnikasi qanday?
Rekombinant DNK texnologiyasi. Ushbu texnologiya besh bosqichdan iborat: (1) kerakli DNKni cheklash joylari orqali kesish, (2) PCR orqali gen nusxalarini kuchaytirish, (3) genlarni vektorlarga kiritish, (4) vektorlarni xost organizmiga o'tkazish va (5) ) rekombinant genlar mahsulotlarini olish