Mundarija:

Genni plazmidga qanday kiritish mumkin?
Genni plazmidga qanday kiritish mumkin?

Video: Genni plazmidga qanday kiritish mumkin?

Video: Genni plazmidga qanday kiritish mumkin?
Video: GEN INJENERLIGI/KANYUGATSIYA/TRANSDUKSIYA/TRANSKRIPSIYA/JARAYONI репетитор по биологии 2024, Noyabr
Anonim

Asosiy qadamlar quyidagilardir:

  1. Kesib oching plazmid va ichiga "joylashtirish" gen . Bu jarayon cheklovchi fermentlarga (DNKni kesuvchi) va DNK ligazasiga (DNKni birlashtiradi) tayanadi.
  2. Kiritmoq the plazmidga aylanadi bakteriyalar.
  3. Ko'p o'sing plazmid -bakteriyalarni tashuvchi va ularni oqsil ishlab chiqarish uchun "zavod" sifatida ishlatish.

Shuningdek, genni GCSE plazmidiga qanday kiritish mumkin?

bu plazmidga kiritiladi ligaza fermentlaridan foydalanish. the plazmid ketadi ichiga bakterial hujayra. transgen bakteriya ko'payadi, natijada ichida inson insulinini ishlab chiqaradigan millionlab bir xil bakteriyalar.

Bundan tashqari, genni qanday qilib subklonlash mumkin? uchun asosiy qadamlar Subklonlash Siz qo'shimchangizni asosiy vektordan chiqarasiz va tozalaysiz, bu qo'shimchani tayyorlangan maqsad vektoriga bog'laysiz, bu bog'lanish reaktsiyasini vakolatli bakterial hujayralarga aylantirasiz. Keyin qo'shish uchun o'zgartirilgan hujayralarni ko'rasiz.

Buni hisobga olsak, genlarni klonlashning 4 bosqichi qanday?

Klassik cheklash fermenti hazm qilish va ligatsiya klonlash protokollarida har qanday DNK fragmentini klonlash asosan to'rt bosqichni o'z ichiga oladi:

  • qiziqtirgan DNKni (yoki maqsadli DNKni) izolyatsiya qilish;
  • bog'lash,
  • transfeksiya (yoki transformatsiya) va.
  • skrining/tanlash tartibi.

Plazmidni qanday kuchaytirasiz?

Eksperimental protsedura

  1. PCRni ishga tushiring va PCR mahsulotini tozalang: Insert DNKni kuchaytirish uchun PCRni ishga tushiring.
  2. DNKingizni hazm qiling:
  3. Insert va vektorni jel bilan tozalash orqali ajratib oling:
  4. Qo'shimchangizni vektoringizga bog'lang:
  5. Transformatsiya:
  6. Tayyor plazmidni ajratib oling:
  7. Plazmidingizni ketma-ketlik bilan tasdiqlang:

Tavsiya: